NY_T 2281-2012 苹果病毒检测技术规范
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ID： |
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0.57 |
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12 |
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日期： |
2024-8-13 |
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ics 65.020,B 16 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 2281—2012,苹果病毒检测技术规范,Protocol for the detection of apple viruses,2012-12-24 发布 2013-03-01 实施,中华人民共和国农业部发布,NY/T 2281—2012,刖 百,本标准按照GB/T 1.1给出的规则起草,本标准由中华人民共和国农业部提出,本标准由全国果品标准化技术委员会(SAC/TC 510)归ロ,本标准起草单位:中国农业科学院果树研究所、农业部果品及苗木质量监督检验测试中心(兴城),本标准主要起草人:董雅凤、张尊平、范旭东、任芳、聂继云,I,NY/T 2281—2012,苹果病毒检测技术规范,1范围,本标准规定了苹果病毒检测的抽样与取样要求、检测方法、判定原则,本标准适用于苹果无病毒母本树、无病毒苗木及苹果植株的苹果花叶病毒(Aつ仇e mosaic virus,ApMV)、苹果褪绿叶斑病毒(A/pZe chlorotic lea fspot 比rus ,ACLSV)、苹果茎痘病毒(A力つZe stem pitting,virus ASPV)、苹果茎沟病毒stem grooving紋シ〃s, ASGV)、苹果锈果类病毒(Aかscar,skin viroid , ASSVd)的检测,2抽样与制样,2.1抽样,2. 1.I无病毒母本树,每株均需检测,2.1.2无病毒苗木,分品种进行抽样。采取随机抽样方法。以666.7 mク抽检10株为基数,每增加666.7 m"增检5,株,不足666.7 m2的按666.7 m2计,2.1.3苹果植株,对疑似感病的植株每株必检,2.2制样,2.2. !木本指示植物检测,温室检测时,早春从待检的苹果植株上取一年生芽嫁接到特定指示植物上。田间检测时,夏末秋初,取待检植株离皮绿枝进行芽接,2.2.2 ELISA 和 RT-PCR 检测,春季取待检苹果植株上幼嫩新鲜叶片;或冬季取休眠枝条的韧皮部组织,3检测方法,3.1 田间症状观察法,检测对象为苹果锈果类病毒和苹果花叶病毒,田间直接观察其症状表现(参见附录A),3.2 木本指示植物检测法,包括温室检测和田间检测,检测对象为苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒、苹果茎沟病毒、苹果花叶病毒和苹果锈果类病毒,具,体操作参见附录B,3.3 酶联免疫吸附法(ELISA),检测对象为苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒、苹果茎沟病毒和苹果花叶病毒,具体操作参见附录,C,3.4 反转录ー聚合酶链式反应(RT-PCR),检测对象为苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒、苹果茎沟病毒、苹果花叶病毒和苹果锈果类病毒,具,体操作参见附录D,1,NY/T 2281—2012,4判定规则,根据附录A.附录D的要求进行检测和判定,如果ー个样品采用了 2种以上检测方法,且检测结果,不一致,则以阳性结果为准,判定为带毒,4. 1苹果无病毒母本树,检出携带主要检测对象中的任何ー种病毒/类病毒,该母本树即判定为不合格,4.2 苹果无病毒苗木,检出某株苗木携带主要检测对象中的任何一种病毒/类病毒,即判定该批苗木不合格,4.3 需要检测的苹果植株,检出携带主要检测对象中的任何ー种病毒/类病毒,则判定该株苹果带毒,2,NY/T 2281—2012,附录A,（资料性附录）,2种非潜隐性病毒病的主要田间症状见表A. 1,表A. 1 2种非潜隐性病毒病的主要田间症状,病毒及类病毒症状类型症状表现,苹果花叶病毒锈果型先从幼果顶部出现淡绿色水渍状斑块,而后向果梗部扩展成木栓化锈斑,与纵纹,随果实生长而发生龟裂,花脸型果实着色后,病果果面显现红绿相间的不规则色斑,呈花脸状,锈果一花脸复合型呈现既有锈斑又有花脸的复合症状,苹果锈果类病毒斑驳型从小叶脉开始发生鲜黄色或黄白色病斑,病斑形状不规则、大小不一、边,缘清晰,环斑型叶片上产生圆形、椭圆形或近圆形黄色环斑,或近似环状的斑纹,花叶型病斑不规则,有较大的深绿与浅绿相间色变,边缘不清晰,条斑型叶片沿叶脉失绿黄化,并蔓延至附近的叶肉组织,呈黄色条斑或网纹状,镶边型叶片边缘发生黄化,形成很窄的黄色镶边,3,NY/T 2281—2012,附录B,（资料性附录）,木本指示植物检测法,B 1温室检测法,B. 1. 1砧木准备,温室检测:早春,将上年播种的实生砧苗移栽于直径15 cm、高25 cm的花盆中,每个花盆栽植1株,将花盆移入温室内。温室温度白天控制在20℃.28℃、夜间9℃.15℃,B. 1.2嫁接,温室检测:砧木开始萌发后,先用嵌芽接法将1个待检芽嫁接在砧木基部,再用切接法在该芽上方,5 cm处嫁接指示植物接穗（带2个.3个饱满芽）,每个样品嫁接4株,B 1.3嫁接后管理,温室检测:嫁接后,将温室温度控制在18℃.26℃。适时浇水、防治害虫和剪除砧木萌篥。待指示,植物长出嫩叶后,每周观察一次,记载症状表现,B. 1.4结果判断,所嫁接的4株中只要有1株呈现表B.1规定的典型症状,即判定该样品携带相应的苹果病毒,表B. 1苹果病毒及类病毒在木本指示植物上的主要症状,B.2田间检测法,病毒及类病毒指示植物指示植物症状,苹果褪绿叶斑病毒苏俄苹果(R12740-7A) 褪绿叶斑,植株矮化,舟形叶,苹果茎痘病毒光辉(Radiant) 叶片反卷,植株矮化,苹果茎沟病毒弗吉尼亚小苹果（Virginia crab） 木质部产生纵向凹陷条沟;有的病株嫁接口周围肿胀,接,合部内有深褐色坏死斑纹;温室鉴定中叶片有时产生黄斑或,环形斑,并扭曲变形,苹果花叶病毒兰蓬王(Lord lamboum……
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